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一站式大提柱式miRNA提取试剂盒
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发布时间：2025-03-12
| 货号： | 80906 |
| 供应商： | 上海研卉生物科技有限公司 |
| 数量： | 现货 |
| 规格： | 5次 |
一站式大提柱式miRNA提取试剂盒使用说明
| 产品及特点 | 本产品是在柱式miRNAout基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。它具有下列特点：样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟得到的小RNA长度大部分在200 nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。小RNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右。无基因组DNA的污染。可用于RT-PCR、miRNA标记、microarray等后续实验。产率一般为10-20 ug/100 mg动物组织，5-10 ug/100 mg植物组织。适用范围广，可以用于动物组织、血液、植物等各种实验材料。 | ||||||||||||||||||
| 规格及成分 |
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| 运输及保存 | 常温运输和保存（但RNA洗脱液需要4℃保存），有效期一年。 | ||||||||||||||||||
| 自备试剂 | 氯仿。 | ||||||||||||||||||
| 使用方法 | 由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2g左右的各种组织，可以在50 mL塑料离心管中操作。新鲜配制裂解液20mL。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合（即溶液A和溶液B各10 mL），然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10平方厘米细胞中加入1 mL新鲜配制的裂解液的比例加入裂解液，用枪轻柔吹打，确保细胞全部裂解。对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每1-5×106悬浮细胞中加入1 mL新鲜配制的裂解液的比例加入裂解液，用枪轻柔吹打，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1 mL新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50 mL塑料离心管中，每克组织加10 mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50 mg/ mL裂解液，否则十分容易产生DNA污染。对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每50-100 mg组织加1 mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对RNALOCKER保存动物或植物组织：先用纸吸去RNALOCKER液体后再剪切成小块，放入50 mL塑料离心管中，每50-100 mg组织加1 mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。将裂解物转移至一个干净的50 mL塑料离心管中，然后加入二分之一体积的自备氯仿（1 mL裂解物需0.5 mL氯仿），振荡器上充分振荡混均30秒。5000-7000 rpm室温离心3-5分钟。将上清液（约12-16mL）转移到一个大提20层离心吸附柱中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA吸附，另一个做小RNA吸附。5000-7000 rpm室温离心大提离心吸附柱1分钟。将穿透液转移到一个新的20层离心吸附柱中。5000-7000 rpm室温离心大提离心吸附柱1分钟，收集管中的穿透液。大RNA将与离心吸附柱的膜结合，小RNA将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA洗脱液。在穿透液中加等体积的溶液C，混匀，此时溶液的总体积约30 mL。分一次或分两次将混合液转移到一大提5层离心吸附柱中，每次转移后需要5000-7000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。加10 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，5000-7000 rpm室温离心1分钟，弃穿透液。加10 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，5000-7000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。5000-7000 rpm室温离心1分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。将大提离心吸附柱转移到一自备的、50 mL RNase-free收集管中，加入0.5-1 mL RNA洗脱液。5000-7000 rpm室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA样品。本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用0.5-1 mL RNA洗脱液（不含RNA的）洗脱3-4次才能把绝大部分RNA洗脱下来。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果RNA洗脱液不够，可以用自备的DEPC水代替。 附录：用10mL自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA的大提离心吸附柱。重复上步一次。干甩一次。加入0.5-1 mL RNA洗脱液，室温放置2-3分钟。5000-7000 rpm室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。 |
本文链接： http://ambion.immuno-online.com/view-1462802606.html
发布于 ： 2025-03-12
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